기초 분자생물학 실험: 유전자 재조합 전과정 (유전자 재조합 전과정)

최미영,권혁빈

서울대학교생물교육과에서학사과정과서울대학교대학원동물학과에서분자유전학으로석사과정을마친후미국시카고대학교(TheUniversityofChicago,Chicago)에서분자생물학으로박사학위를취득하였다.미국펜실베이니아대학교(UniversityofPennsylvania,Philadelphia)하워드휴즈의학연구소(HowardHughesMedicalInstitute)에서연구하였고,지금은선문대학교제약생명공학과에서교육과연구에전념하고있다.『핵심바이러스학』,『유전학실험서』,『생명과학실험서』,『미생물학실험서』등의저서와『세포생물학』,『분자생물학』등의번역서가있다.

기초분자생물학실험서전체흐름도XII

1부분자생물학실험의기초3
실험1A?기초분자생물학실험시주의사항및보고서작성5
1.이론적배경5
실험1A흐름도?기초분자생물학실험시주의사항및보고서작성6~7
2.기기및도구8
3.실험과정8
4.실험상일반적인주의사항8
5.?분자생물학실험에사용되는세균및기타생물을다룰때의주의사항10
6.열원,열기구및전원을사용할때주의사항11
7.유리기구를사용할때주의사항13
8.화학약품을사용할때주의사항14
9.실험사고발생시응급조치요령15
10.실험실안전주의표시16
11.실험보고서작성의기본요령17
12.결과18
13.참고문헌및웹사이트18

실험1B?기초분자생물학실험에사용되는도구및기기사용법19
1.이론적배경19
실험1B흐름도?기초분자생물학실험에필요한도구및기기사용법20~21
2.기기및도구22
3.실험과정22
4.결과46
5.참고문헌및웹사이트46
실험2?기초분자생물학실험에필요한용액및배지제조51
1.이론적배경51
실험2흐름도?기초분자생물학실험에필요한용액및배지제조52~53
2.재료및기구54
3.기본시약만들기54
4.세균배양배지만들기58
5.결과59
6.참고사항60
7.참고문헌및웹사이트60

2부반응능세포만들기와형질전환효능측정65
1.유전자재조합기술66
2.반응능세포67
3.플라스미드DNA와클로닝벡터67
4.항생제및항생제저항성유전자와그산물69

실험3?반응능세포(competentcell)만들기71
1.이론적배경71
실험3흐름도?반응능세포(competentcell)만들기72~73
2.재료및기구74
3.실험과정74
4.결과76
5.더알아보기76
6.참고사항76
7.참고문헌및웹사이트77

실험3S?반응능세포(competentcell)를만드는간단한방법83
실험과정83
실험3S흐름도?대체실험3S:반응능세포를만드는간편한방법84~85

실험4?제작한반응능세포의형질전환효능측정86
1.이론적배경86
실험4흐름도?제작한반응능세포의형질전환효능측정88~89
2.재료및기구90
3.실험과정90
4.결과92
5.더알아보기93
6.참고사항93
7.참고문헌및웹사이트94

3부플라스미드DNA정제와재조합DNA제작99
1.유전자재조합실험과정100
2.플라스미드DNA의정제100
3.플라스미드DNA의전기영동확인102
4.제한효소104
5.DNA연결반응및대장균형질전환106

실험5-1?플라스미드DNA정제:알칼리세포용해방법107
1.이론적배경107
실험5-1흐름도?플라스미드DNA정제-알칼리세포용해방법108~109
2.재료및기구110
3.실험과정110
4.결과113
5.더알아보기113
6.참고사항113
7.참고문헌및웹사이트114

실험5-2?플라스미드DNA의정제:실리카컬럼흡착법115
1.이론적배경115
실험5-2흐름도?플라스미드DNA정제?실리카컬럼흡착법116~117
2.재료및기구118
3.실험과정118
4.결과121
5.더알아보기121
6.참고문헌및웹사이트121

실험6?정제한플라스미드DNA의전기영동확인및농도측정126
1.이론적배경126
실험6흐름도?정제한플라스미드DNA의전기영동확인및농도측정128~129
2.재료및기구130
3.실험과정130
4.결과133
5.더알아보기133
6.참고사항134
7.참고문헌및웹사이트134
실험7?제한효소절단반응과DNA절편의전기영동확인139
1.이론적배경139
실험7흐름도?제한효소절단반응과DNA절편의전기영동확인140~141
2.재료및기구142
3.실험과정142
4.결과144
5.더알아보기146
6.참고사항146
7.참고문헌및웹사이트148

실험8?DNA연결반응과대장균형질전환154
1.이론적배경154
실험8흐름도?DNA연결반응과대장균형질전환156~157
2.재료및기구158
3.실험과정158
4.결과161
5.더알아보기161
6.참고사항161
7.참고문헌및웹사이트163

실험8S?DNA절편의연결반응후변화관찰169
1.이론적배경169
실험8S흐름도?DNA절편의연결반응후변화관찰170
2.재료및기구171
3.실험과정171

4부형질전환체선발177
실험9-1?콜로니PCR에의한형질전환체선발179
1.이론적배경179
실험9-1흐름도?콜로니PCR에의한형질전환체선발180~181
2.재료및기구182
3.실험과정182
4.PCR산물확인184
5.결과185
6.더알아보기185
7.참고문헌및웹사이트185

실험9-2?복제평판법(replicaplating)에의한형질전환체선발186
1.이론적배경186
실험9-2흐름도?복제평판법(replicaplating)에의한형질전환체선발187
2.재료및기구188
3.실험과정188
4.결과190
5.더알아보기190
6.참고문헌및웹사이트190

실험10?형질전환체에서재조합플라스미드정제및전기영동확인195
1.이론적배경195
실험10흐름도?형질전환체에서재조합플라스미드분리및전기영동확인196~197
2.재료및기구198
3.실험과정198
4.결과201
5.더알아보기202
6.참고문헌및웹사이트202
실험11?제한효소로재조합플라스미드확인:제한효소절단과전기영동207
1.이론적배경207
실험11흐름도?제한효소로재조합플라스미드확인:제한효소절단과전기영동208~209
2.재료및기구210
3.실험과정210
4.결과213
5.더알아보기213
6.참고문헌및웹사이트213

5부발현벡터의유전자발현유도와단백질산물확인219
1.발현벡터(expressionvector)220
2.?SDS-PAGE(polyacrylamidegelelectrophoresis)의원리와응용221

실험12?유전자발현유도와SDS-PAGE젤만들기222
1.이론적배경222
실험12흐름도?유전자발현유도와SDS-PAGE젤만들기224~225
2.재료및기구226
3.실험과정226
4.결과230
5.더알아보기230
6.참고문헌및웹사이트230
실험13?SDS-PAGE를이용한단백질산물확인235
1.이론적배경235
실험13흐름도?SDS-PAGE를이용한단백질산물의확인236~237
2.재료및도구238
3.실험과정239
4.결과241
5.더알아보기241
6.참고문헌및웹사이트242

6부동식물조직에서RNA분리와유전자발현분석247
1.RNA분리의일반적인사항248
2.RNase의오염및제거249
3.전체RNA의분리방법249
4.분리한RNA를이용한유전자발현분석250

실험14-1?동물조직에서RNA분리및확인251
1.이론적배경251
실험14-1흐름도?동물조직에서RNA분리및확인252~253
2.재료및기구254
3.실험과정254
4.결과256
5.더알아보기256
6.참고사항257
7.참고문헌및웹사이트258

실험14-2?식물조직에서RNA분리및확인259
1.이론적배경259
실험14-2흐름도?식물조직에서RNA분리및확인260~261
2.재료및기구262
3.실험과정262
4.결과265
5.더알아보기265
6.참고사항265
7.참고문헌및웹사이트266

실험14S?실리카컬럼을이용한RNA분리및확인272
1.실험과정272
2.참고문헌및웹사이트273
실험14S흐름도?실리카컬럼을이용한RNA분리와확인274~275

실험15?RT-PCR을이용한유전자발현분석276
1.이론적배경276
실험15흐름도?RT-PCR을이용한유전자발현분석279
2.재료및기구280
3.실험과정280
4.결과288
5.더알아보기288
6.참고문헌및웹사이트289

7부생물정보학을이용한유전자분석295
실험16?생물정보학을이용한유전자염기서열분석298
1.이론적배경298
실험16흐름도?생물정보학을이용한유전자염기서열분석300~301
2.실험과정302
3.결과306
4.더알아보기306
5.참고문헌및웹사이트306

부록pA20&pK20sequences311
pA20nucleotidesequence(4,097bp)312
pK20nucleotidesequence(4,046bp)314

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